01

（1）如果培養(yǎng)細胞未添加抗生素，細胞污染則是不可避免的。

① 用肉眼和顯微鏡進行檢查。

② 如果細胞被污染則要棄掉。

（2）由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測。

（3）檢測可能污染的途徑和原因。

02

03

（1）復蘇另一支凍存的細胞，并且與正在培養(yǎng)的細胞加以比較。兩種細胞的培養(yǎng)應分開，以免在培養(yǎng)之初就產生污染。隨后按（2）～（4）步的方法做排查。

（2）對傳代培養(yǎng)的細胞進行計數，并繪制生長曲線，與以前培養(yǎng)該細胞的資料進行比較，檢查是否有下列改變:

① 傳代時是否接種密度過低。

② 細胞傳代是否過于頻繁。

③ 傳代前細胞平臺期是否過長。

（3）是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號，檢查批號和供貨商。

（4）是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞，應檢測:

① 胰蛋白酶（其他消化試劑）消化時間是否過長。

② 消化液的濃度和活性是否過高、過強。

③ 胰蛋白酶消化時，孵箱溫度是否過高。

④ 吹打消化細胞時是否過于用力。

⑤ 細胞是否對 EDTA過于敏感（如果添加了EDTA）。

⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。

⑦ 是否使用了一批劣質的胰蛋白酶消化液。

溫度設定不準

a　自動調溫器損壞。

b　開關孵箱門過于頻繁。

c　孵箱門未關緊。

d　風扇損壞造成散熱不均。

孵箱濕度不能維持

a　水盤中未加水。

b　孵箱有滲漏。

c　開關孵箱門過于頻繁。

d　在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS，每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。

孵箱的CO2濃度不準

a　開關孵箱門過于頻繁。

b　CO2控制器出現問題。

END